محیط کشت سلولی
محیط کشت سلولی، شرایطی است کاملا استریل و حساس برای کشت و بررسی سلولهای جانداران. کشت و بررسی سلولهای پروکاریوتی و یوکاریوتی در فلاسک های فیلتر دار یا فاقد فیلتر و پلیت های استریل و مخصوص کشت سلول تحت شرایط مناسب، کشت سلول نامیده میشود که برای کشت سلولهای جانوران استفاده میشود. برای کشت سلول از محیط کشت سلولی مخصوص استفاده میکنند. سلولهای جانوری در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد و در انکوباتور‌های CO2 دار و شرایط خاص کشت داده میشود.
شرایط کشت سلولهای جانوری
کشت سلولهای جانوری در شرایط استریل و عاری از میکروارگانیسم ها و پاتوژن ها انجام میشود. رشد سلولهای جانوری کند تر از رشد باکتریها است و آلودگی محیط کشت توسط باکتریها بسیار زیاد خواهد بود. جهت جلوگیری از رشد پاتوژن ها از آنتی بیوتیک مانند پنیسیلین و استرپتومایسین استفاده میشود.
کاربردهای کشت سلولی
برای بررسی چرخه رشد سلولی، کنترل رشد سلول های سرطانی و بررسی بیان ژن ها باید کشت سلول در خارج بدن صورت بگیرد تا بهتر بتوان در مورد نوع رشد و سرعت رشد سلولها را مطالعه کرد.
برای تکثیر بهتر سلولها در محیط کشت باید تراکم سلول در محیط کشت زیاد نباشد. باید چند روز یکبار، سلولها را به محیط جدیدی انتقال (پاساژ) داد. اگر چگالی و
حجم سلولها زیاد شود بعلت عدم تماس تکثیر کاهش و تمام شده و سلولها متمایز میشوند.
انواع محیط کشت سلولی
کشت ارگان
کشت بافت
کشت سلول
در کشت سلول های جانوری بعلت اینکه سلول های جدا شده از میزبان پرسلولی کشت داده میشود. ایجاد شرایطی مشابه هومئوستازی میزبان اهمیت دارد. در پستانداران سیستم گوارش با هضم مواد خوراکی، ترکیبات قابل جذب برای سلول فراهم میکند و توسط گردش خون عمومی در معرض سلول ها می گذارد. محیط کشت کامل مختص سلول از دو بخش عمده تشکیل شده است بنام محیط کشت پایه (Basal Media) و سرم. برای رشد رده های سلولی، مواد مغذی خاصی نیاز است.
محیط کشت پایه و سرم
محیط کشت پایه (Basal Media) محیطی است که سلول ها در محیطی با pH مناسب رشد میکنند. محیط های پایه با توجه به ترکیباتشان تفاوت دارند و برای کشت انواع خاصی از سلولها به کار میروند. محیط کشت پایه برای حفظ pH از سیستم بافری و معرف رنگی (Phenol Red) برای تغییرات pH استفاده میکند. بافر محیط کشت پایه برای تعادل نیاز به دی اکسید کربن دارد و سیستم کربنات/بیکربنات را تشکیل می دهد.
سرم مخلوطی از پروتئین ها، ویتامین ها و فاکتور های رشد است. در محیط کشت سلول از سرم جنین گاوی (FBS) استفاده میکنند. سرم جنین گاوی (FBS) بسیار غنی از موادمغذی بوده و فاکتور های رشد بیشتری دارد.
روشهای جداکردن سلولها برای کشت
سلولها به چندین روش برای کشت جدا میشوند. سلولها را از خون استخراج و خالص کرد. تنها سلولهای سفید در محیط کشت قادر به رشد هستند. سلولهای تک هسته‌ای توسط هضم آنزیمی از بافت صاف جدا میشوند. کلاژناز، تریپسین یا پروناز از مهم‌ترین آنزیم‌ها هستند که ماتریکس خارج سلولی را از بین میبرند.
گذاشتن قطعاتی از بافت جانداران در محیط کشت یک روش دیگرکشت سلول است .در این روش سلولها در محیط کشت گسترش پیدا میکنند .این روش کشت ریزنمونه معرفی میشود.
سلولهای پرایمری مستقیم از فرد گرفته شده و عمر کوتاهی دارند. سلول هایی که از تومور گرفته میشوند، عمر بیشتری دارند . رده سلولی نامیرا با جهش تصادفی تکثیر شده و نماینده انواع خاص سلولی است.
آزمون مهاجرت سلولی (Migration Assay) به روش scrach
خدمات استخراج و کشت سلول های تک هسته ای (سلول مونوسیتی) خون محیطی (PBMC)
آنالیز بررسی سمیت سلولی با روش (MTT)
ارزیابی فعالیت کاسپازهای مختلف در رده سلولی
اندازه گیری میزان نیتریک اکساید NO داخل سلولی
آنالیز بررسی بررسی چرخه سلولی(Cell Cycle) به روش فلوسایتومتری
ارزیابی سلول های آپوپتوتیک و نکروتیک به روش رنگ آمیزی Annexin V-FITC/PI
تعیین درصد ROS با رنگ DFC توسط FLowcytometry
سنجش فعالیت آنزیم کاتالاز
تصویر برداری با میکروسکوپ نوری
تصویر برداری با میکروسکوپ فلورسانس
تصویربرداری با میکروسکوپ اینورت
خدمات رنگ آمیزی فلورسانس هوخست جهت بررسی مورفولوژی هسته ی سلولی
خدمات رنگ آمیزی فلورسانس داپی جهت بررسی مورفولوژی هسته ی سلولی
رنگ آمیزی PI/Ao (Propidium Iodide/ Acrylic Orange) جهت شناسایی سلول های آپوپتوتیک و نکروتیک
سانتریفیوژ
پمپ مکش
فور
ترازوی دیجیتال
روتاتور
لوله فالکون
هود شیمیایی
ورتکس
یخ ساز
تانک ازت
شیکر انکوباتور
بن ماری
هدایت سنج
میکروسکوپ نوری
میکروسکوپ فلورسنت
میکروسکوپ اینورت